简介

活性氧（ROS）是含氧的化学反应性分子（如超氧化物，羟基，单线态氧和过氧化物）。由于存在不成对的价电子电子，ROS具有高反应性。 ROS形成氧的正常代谢的天然副产物，并且在细胞信号传导和体内平衡中具有重要作用。然而，在环境压力（例如，UV或热暴露）期间，ROS水平可显着增加。 这可能导致细胞结构的显着损害。累积地，这被称为氧化应激。 ROS也由外源性源如电离辐射产生。在氧化应激条件下，ROS产生显着增加，导致膜脂，蛋白质和核酸的后续改变。这些生物分子的氧化损伤与衰老以及各种病理事件有关，包括动脉粥样硬化，癌变，缺血再灌注损伤和神经退行性疾病。

细胞渗透性ROS Brite TM APF和HPF试剂是非荧光的并且在与羟基自由基或过氧亚**根阴离子反应时产生亮绿色荧光（激发/发射= 490 / 515nm），APF也将与次**根阴离子（OCl）反应。此外，APF和HPF在过氧化物酶存在下也与过氧化氢反应。 可以使用荧光成像，高内容成像，微孔板荧光测定法或流式细胞术测量所得荧光。 APF和HPF显示出对光诱导氧化的相对高的抗性。 APF和HPF在与羟基或过氧亚**根阴离子反应之前是非荧光的。

物理化学特性

ROS Brite™染料的分析方案

该步骤仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。在制备ROS Brite™工作溶液之前，根据需要处理细胞。

1）在DMSO中制备10至20mM ROS Brite TM APF（或HPF）储备溶液。通过将DMSO储备溶液稀释到含有20mM Hepes缓冲液（HHBS）的Hanks溶液中，制备1至10μM的工作溶液。

2）根据需要处理细胞（例如，用50-100nM血管紧张素II处理RASM细胞3-5小时）

3）用ROS Brite™APF（或HPF）（1-10μM，步骤＃1）在37℃孵育细胞20-60分钟。

4）用HHBS缓冲液替换染料加载溶液。

5）用适当的荧光仪器在Ex / Em = 490 / 525mm（截止= 515nM）下用底部读取模式分析细胞（例如，用于荧光显微镜的FITC滤光器，用于流式细胞仪的FL1滤光器）。

注意：BSA和酚红会影响荧光，应谨慎使用。 APF和HPF均可用于溶液测定或细胞内测量。

参考文献

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