中和抗体检测——RSV疫苗评价金标准

呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）是一种包膜单股负链RNA病毒， RSV可以引起全年龄段人群的呼吸道感染，是世界范围内引起5岁以下儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）最常见的病毒病原，是造成婴幼儿病毒性呼吸道感染住院的首要因素。

目前对于RSV的防治手段主要是疫苗及抗体药物，中和抗体检测是鉴定疫苗有效性的黄金标准，测定RSV（呼吸道合胞病毒）中和抗体的方法有多种，主要有荧光斑点计数法（Focus-Forming Assay, FFA）、噬斑法（Plaque Assay）、细胞病变效应法（Cytopathic Effect, CPE）、和ELISA（酶联免疫吸附试验）等。

荧光斑点计数法-RSV中和抗体检测的实验结果案例（左上角为荧光数值）

快速准确的荧光斑点计数法

荧光斑点计数法（Focus-Forming Assay, FFA）相对于传统的细胞病变效应（Cytopathic Effect, CPE）法、噬斑法（Plaque Assay）和其他方法具有以下一些优势：

1. 灵敏度和特异性高

a. 更高的灵敏度

迪福润丝生物的荧光斑点计数法通过DIFF-GFP荧光报告病毒检测或标记病毒抗原的荧光抗体检测，可以识别早期感染和低水平的病毒复制，无需等待病毒大量复制引起明显的细胞病变。

b. 特异性强

荧光斑点计数法可以更准确地识别RSV病毒感染，不容易受到其他细胞变化的干扰。

2. 快速结果

荧光斑点计数法通常能够在较短时间内获得结果，因为它不依赖于观察显著的细胞病变。相比之下，其他检测方法可能需要更长的时间来观察到细胞病变，迪福润丝生物的RSV中和抗体检测24小时即可观察荧光反应。

3. 定量准确

荧光斑点计数法可以通过计数荧光斑点的数量直接定量病毒感染的程度，不依赖主观观察和评分，定量精度较低从而更精确地测定中和抗体的效价。

综合对比表格：

荧光斑点计数法在检测RSV中和抗体时具有更高的灵敏度和特异性，能够快速获得准确的定量结果，并且适合自动化和高通量分析。这些优势使其在许多情况下优于传统的CPE法、噬斑法（Plaque Assay）和其他检测方法，特别是在需要快速、准确和高通量检测的科研和实际应用中。尽管初期设备和试剂成本准备上需要一定投入，但其在快速、准确和高效检测方面的优势，使其成为检测RSV中和抗体的优选方法。

一天出结果！RSV中和抗体检测服务流程

迪福润丝生物自有的的CRO服务平台「DIFF+」可针对RSV疫苗效果进行评价，提供基于荧光斑点计数法的RSV中和抗体检测服务，该检测方法能够与传统的PRNT检测方法建立线性相关性，灵敏度高、检测迅速（24h即可出结果），并且该实验方法的特异性、重复性均能满足中和实验的要求，适用于高通量样本的检测。

RSV中和抗体检测流程图

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迪福润丝生物建立了完善的生物资源库（Bio Database）,可提供丰富的RSV毒株进行更加准确可靠的疫苗评价。检测用毒株包括RSV A和RSV B两种亚型共六种毒株（A2、Long、CH-18537、9320、ON1、BA9）。

RSV中和抗体检测服务案例

基于上文所示的检测流程，通过DIFF-GFP荧光报告病毒，迪福润丝生物可进行RSV疫苗中和抗体检测及抗病毒药物筛选等服务，24小时可快速得到实验结果。将待测样本与RSV病毒共孵育后加入待感染细胞，CC孔为细胞对照，不加病毒，VC孔为病毒对照，只加病毒，检测结果如图所示。 

根据荧光斑点计数仪的斑点计数结果，半中和滴度NT₅₀使用GraphPad Prism软件中的非线性回归分析计算值。

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