产品内容： 
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。 
试剂一：粉剂1瓶，4℃避光保存，使用前加10mL蒸馏水溶解。 
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。 
工作液：临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1混合。使用前37℃温育2min。
产品说明： 
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与ATP 之间的转磷 酰基反应，在能量运转、肌肉收缩和ATP 再生中有重要作用，是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。 CK 催化磷酸肌酸和ADP 生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP 与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖， 6-磷 酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm 光吸收值增加。 自备实验用品及仪器： 天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 
 
操作步骤： 
一、粗酶液提取 
1. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加 入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。 
2. 血清样本：直接测定。 
二、测定操作表 
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm。 
2．操作表  
 
空白管
测定管
 酶液（μ L）
 
60
工作液（μ L） 
150
150
 H2O（μ L） 
150
90
混匀，于1mL 石英比色皿，对照管调零，测定340nm 的初始值A1，测定完立即放入37℃ 水浴，准确计时，分别测定1min，2min，3min 时的吸光值A2，计算时取平均值，△A= A2-A1。
 注意：空白管只需测定一次。
三、CK 活性计算公式 
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下 
（1）按组织蛋白含量计算 
酶活定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。 
CK活性（nmol/min/ mg prot）= △A/（ε×d）×V反总÷（V样×Cpr）= 804×△A÷Cpr 
（2）按组织样本质量计算： 
酶活定义：37℃，pH7.0时，每克样品1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。 
CK活性（nmol/min/g）= △A/（ε×d）×V反总÷（V样÷V样总×W）= 804×△A÷W 
（3）按血清计算： 
酶活定义：37℃，pH7.0时，每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。 
CK活性（nmol/min/L）= △A/（ε×d）×V反总÷V样×1000= 804000×△A ε:NADPH微摩尔消光系数，6220 L /mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积， 0.3mL；V样：反应体系中样本体积，0.06mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。 
 
b．用96孔板计算公式如下 
（1）按组织蛋白含量计算 
酶活定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。 
CK活性（nmol/min/ mg prot）= △A/（ε×d）×V反总÷（V样×Cpr）= 1608×△A÷Cpr 
（2）按组织样本质量计算： 
酶活定义：37℃，pH7.0时，每克样品1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。 
CK活性（nmol/min/g）= △A/（ε×d）×V反总÷（V样÷V样总×W）= 1608×△A÷W 
（3）按血清计算： 
酶活定义：37℃，pH7.0时，每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。 
CK活性（nmol/min/L）= △A/（ε×d）×V反总÷V样×1000= 1608000×△A ε:NADPH微摩尔消光系数，6220 L /mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应体系总体积， 0.3mL；V样：反应体系中样本体积，0.06mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。 
注意事项： 
1. 配制好的工作液4℃稳定7 天，请尽量配制后尽快使用。 
2. 血清的CK 不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定24h。
3. 样品蛋白质含量需要另外测定，可选用BCA 蛋白含量测定试剂盒进行测定。 4. OD 值大于 0.5 可用提取液适当稀释样品，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。