在细胞培养中,培养基、胎牛血清是促进细胞生长,PBS缓冲液是用于清洗细胞或是配置相关溶液,还有一种试剂,是在整个细胞培养过程中不可或缺的,那就是胰蛋白酶消化液。现在市面常见的胰蛋白酶大致可以分为两种,动物源性的胰蛋白酶和重组胰蛋白酶(非动物源性胰酶)。
现在市面上广泛使用的动物源性的胰蛋白酶主要是提取自牛或猪的胰腺组织,动物细胞表面很多和培养皿结合的蛋白都是带有钙或者镁离子的蛋白,而胰酶能够降解这种带有钙或者镁离子的蛋白,因此它可以将细胞膜上和培养皿壁结合的蛋白降解,从而使细胞从培养皿壁脱离。胰酶中常含的EDTA能够螯合这些钙镁离子,从而促进消化。
动物源性胰蛋白酶可在-20℃下保存一年。随着时间延长,胰酶的消化能力减弱。胰酶可分装冻存,在使用前从-20℃冰箱取出。尽量避免在4℃长期保存。
在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。具体的消化时间要根据细胞特性操作。
在消化细胞时,消化了很长时间,但细胞仍然难以脱离细胞瓶,可能是由于胰酶活性不足、血清抑制、高汇合度和酶无法进入细胞基质。需要更换使用新鲜批次的胰酶,彻底清洗移除血清,并在低细胞浓度时解离细胞。
细胞消化后出现培养时细胞聚团结块,需要排查是否是因为使用了高浓度胰酶,操作时过度吹打,或者是较长时间的离心都有可能会造成的这种情况。可以在消化时镜下观察细胞消化的状态,操作过程中注意吹打力道,接种细胞时可以将成团的细胞轻微吹散。
部分客户在收到商家发货的含酚红的胰蛋白酶后,会发现颜色有偏橙色,除却暴力运输、漏液污染等可能因素外,还有一种可能性是因为保存条件的影响导致。针对干冰运输过程中导致的 pH 值的变化,BC实验室对干冰运输导致的胰蛋白酶颜色异常进行过长期的跟踪验证,发现胰酶的运输通常是使用干冰维持低温,干冰挥发的二氧化碳于胰酶中溶解的二氧化碳可能会存在极少部分的气体交换,导致溶液 pH 偏移。而酚红在胰酶溶液里作为 pH 指示剂,因此胰酶 pH 的变化是肉眼可观察到的。通过 pH 值测定我们发现:pH 会从 7.2-7.4 变化到 6.7 左右。结果显示干冰运输导致的颜色变化对胰酶的消化作用及对细胞活率没有影响,变色的胰酶仍能很好的应用于细胞消化。
当然了,如果发现胰酶变色的同时还伴有异味或者有明显沉淀物,也需要排查是否是因为污染导致,不确定的情况下还是建议和厂家确认后再进行使用,以免影响细胞状态。